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更新時間：2017-06-01 
瀏覽次數(shù)：1025elisa試劑盒的夾心法，是一種很常規(guī)的檢測方法。它是怎么樣工作的，原理，操作又是如何呢？？
1。在檢測之前，兩種抗體都應該被純化，并且必須被標記。
2。對于大多數(shù)應用程序，一個聚氯乙烯（PVC）微孔板是的；然而，參考制造商的指南來決定蛋白質(zhì)的結(jié)合板的zui合適的類型。
三.每口井加入約50μL抗體溶液（PBS中的20μg/L），將未標記的抗體與每個井的底部結(jié)合。聚氯乙烯將綁定約100納克/井（300毫微克/平方厘米）。使用的抗體的數(shù)量將取決于個別化驗，但如果需要zui大結(jié)合，使用至少1μg /井。這是遠遠高于能力的井，但綁定將發(fā)生更迅速，并結(jié)合溶液可以保存和再次使用
4。培養(yǎng)板在4°C允許完整的結(jié)合。
5。用PBS清洗酶標板兩次。500毫升噴瓶方便?？贵w溶液沖洗可以把板在合適的容器中刪除。
6。其余位點的蛋白結(jié)合在微孔板必須用封閉液孵育飽和。用3%的威爾斯/ PBS與0.02%*填充到頂部。孵化2小時通宵在室溫空氣潮濕。
注意：*是一種抑制劑或辣根過氧化物酶。如果HRP標記的抗體將用于檢測，不包括*在緩沖液或洗滌溶液中。
7。用PBS清洗酶標板兩次。
8。添加50μL抗原解酶標板（抗原溶液應滴定）。所有的稀釋液應在緩沖完成（3%牛血清白蛋白/ PBS）。放置至少2小時，在潮濕空氣中室溫
9。用PBS洗盤子四次。
10、添加標記的第二抗體。在初步實驗中可以確定添加量。為了準確定量，第二抗體應過量使用。所有的稀釋液應在緩沖了。
11。潛伏在潮濕的氣氛中室溫2小時或更多。
12、用PBS的幾種變化清洗。
13、添加基材如制造商指示。經(jīng)過建議的孵育時間已經(jīng)過去，在目標波長的光學密度，可以測量在ELISA板閱讀器。
注意：由于潛在致癌性，一些酶底物被認為是有害的。妥善處理，并參考材料安全數(shù)據(jù)表，以妥善處理預防措施。
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