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更新時間：2022-11-09 
瀏覽次數：756鐵離子檢測試劑盒這么操作更準確
描述：
鐵是人體必需的元素之一，對人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就會造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細胞內，各組織、器官包括各內分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內含量較為豐富。成人體內含鐵3～5克，大部分都以蛋白質復合物形式存在，極少部分以離子的形態存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細胞鐵離子，線性范圍5~300uM。產品包括標準品和空白對照，本試劑盒可進行100個樣品的檢測。
原理：
鐵與蛋白結合成復合物，在酸性介質中鐵從復合物中解離出來，再被還原劑還原成二價鐵，并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在540-580nm處可比色測定。 其反應如下圖所示：
組成：
1. 細胞裂解液： 20 ml
2. 緩沖液： 5ml
3. 檢測劑： 3ml
4. 標準品： 1ml
5. 稀釋用液： 20ml
儲存：4℃保存，6個月有效。
適用范圍：該試劑盒可用于培養細胞中鐵離子定量檢測。
用戶自備：4.5%高錳酸鉀溶液5ml（0.225g高錳酸鉀溶解于5ml純水中）
操作步驟：
1. 樣品準備：
實驗建議使用六孔板培養細胞。將DMEM培養過的細胞用冷的PBS 2ml洗兩遍，將PBS吸棄（若不馬上檢測可將其凍存于-20℃）。200ul/孔（或根據實際情況適量增減）裂解液裂解細胞，置于搖床裂解2h。
2. 標準品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標準品母液稀釋為：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設置0濃度對照反應管。
3. 將緩沖液與4.5%高錳酸鉀溶液按1:1混勻，稱為混液A。
4. 參考下表使用1.5ml離心管，設置空白對照管、標準品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高，用裂解液適當稀釋后再進行測定。
空白對照 | 稀釋后的標準品 | 裂解的樣品 | |
稀釋用液 | 100μl | － | |
混液A | 100μl | 100μl | 100μl |
樣品 | － | － | 100μl |
標準品工作液 | － | 100μl | － |
5. 混勻，60℃ 孵育1h。
6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。
7. 加入30ul 鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。此步可能產生絡合物沉淀，用移液器輕輕吹打即可溶解，若沉淀不溶，12000rpm離心5分鐘，取上層清液即可。
8. 取200ul 于96孔板，在550nm測定吸光度。如果不能測定550nm，也可以在540nm~580nm范圍內檢測。
9. 繪制標準曲線并計算鐵離子濃度。
說明：
1. 本試劑盒不受錳離子、鎂離子、鎳離子和鋅離子等的干擾。
2. 操作過程中，樣品與試劑等避免與鐵器接觸，以防污染。
3. 所測樣本的值高于標準曲線的上限，應稀釋樣品后重新測定。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作，檢測試劑有腐蝕性，請小心操作，若不慎沾到皮膚上請馬上用清水沖洗干凈。
5. 該試劑盒僅供科學研究使用。
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