什么是細菌內毒素？
細菌內毒素（脂多糖，LPS）是革蘭氏陰性細菌細胞壁的主要成分。人們在研究革蘭氏陰性菌血癥和內毒素血癥的過程中，發現細菌內毒素在其中起著關鍵的作用，內毒素使機體免疫功能嚴重受損，進一步的發展可能引發膿毒性休克，彌散性血管內凝血，急性呼吸窘迫綜合癥，全身炎癥反應綜合癥或致命性多器官功能衰竭。因此，內毒素的去除對于人類疾病治療的注射型藥品、生物制品等都是必須的，尤其對于基因藥物、蛋白藥物、單抗克隆藥物、生物疫苗、小分子化學藥物等生物制品的下游純化處理來說就顯得非常重要。
細菌內毒素具有很強的耐熱性和化學穩定性，100℃以下無大變化，在120℃高溫下加熱4小時僅能破壞98%，要*滅活需在180℃高溫下，加熱2小時以上，這樣的方法進行內毒素去除有相當難度。一般化學藥品不影響細菌內毒素的活性，只有強酸、強堿或強氧化劑可以破壞細菌內毒素。
內毒素檢測試劑盒細菌內毒素去除的原理
因細菌內毒素體積小，耐熱性及化學穩定性強，所以一般的過濾、加熱和化學方法不易去除或滅活內毒素。現比較常用的內毒素去除方法多為超濾法或親和層析法。本試劑盒使用的是一類內毒素去除樹脂，它以生物安全性*的內毒素特異吸附物質為配體，經此親和樹脂純化，樣品終的內毒素水平可低于0.1 EU/ml。而且經過親和純化后沒有對人體有毒有害物質殘余，適合抗體、疫苗等生物制品的內毒素去除。
內毒素檢測試劑盒內毒素去除實驗操作
親和層析內毒素去除的方法操作較簡單，具體操作如下：
樣品處理：樣品在上樣前建議離心或用0.22μm或0.45μm濾膜過濾，減少雜質，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。樣品PH好控制在7-8，是內毒素結合至柱子上佳pH條件。樣品好控制適當的離子強度，減少非特異性吸附，如0.15-0.5M的NaCl。
活化樹脂：將預裝柱置于鐵架臺，垂直固定，去除預裝柱頂部的蓋子，打開流速控制器，使保護液在重力作用下流干，加入5ml再生緩沖液（預冷），調節流速控制器，保持流速在0.25ml/min（或者1滴/6s），待再生緩沖液流干，再加入5ml再生緩沖液（預冷），再重復操作兩次，確保體系保持無熱原存在。即使是次使用也必須進行這一步操作。這步操作大約需要60分鐘完成。
平衡樹脂：活化完畢，加入6ml平衡緩沖液（預冷），沿柱管內壁均勻加入其中，保證清洗柱管的內壁，調節流速控制器，保持流速在0.5ml/min（或者1滴/3s），流干平衡緩沖液，再按此操作重復兩次。這步操作大約需要40分鐘完成。
內毒素去除：2ml樣品加到平衡后的層析柱中，調節流速在0.25ml/min（或者1滴/6s），不接收流出液。當樣品流完，繼續添加樣品，樣品可以加滿柱管，同時收集流出液，即為除熱原的樣品。為了降低樣品的損失，樣品流完后，再添加2ml平衡液，并與之前的流出液合并。檢測樣品濃度及內毒素水平。
再次使用：如果流出樣品內毒素水平未能達到預期值，需要將預裝柱按照步驟2、3重新再生、平衡，然后上樣純化。
保存條件：如果預裝柱用完后需要保存，先用10ml平衡緩沖液（預冷）平衡柱子，待平衡液流干，加入10ml 20%乙醇溶液并于4℃保存。
內毒素檢測試劑盒內毒素去除親和填料的注意事項：
1、內毒素去除用的親和填料每次使用前都需用再生液和平衡液處理；
2、實驗過程中使用的相關溶液和器具均要除熱原，防止引入內毒素污染；
3、適當延長填料與樣品溶液的處理時間可以加大內毒素的吸附量；
4、樣品如果本身是帶負性電荷，為增加樣品回收率，樣品中可以加0.2M NaCl；
5、樣品pH在7-8范圍內，可以提高內毒素去除效率同時減少非特異性吸附；
6、樣品內毒素如果一次去除不*，可以重復，直到合格為止；
7、親和填料保存條件為20%乙醇，4~8℃。
更新時間：2019-10-23 
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