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更新時間：2016-04-26 
瀏覽次數(shù)：1789雙PAG免疫金銀染色原理
(一)染色流程：
(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min.
(2)0.1%胰蛋白酶37℃消化20min,或抗原修復(fù)20min(98℃)，自然冷卻至室溫。
(3)0.05mol/L(pH7.4) TBS洗3×3min.
(4)1%EA(卵蛋白)15min,不洗。
(5)適當(dāng)稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h,或37C孵育30min.
(6)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×5min.
(7)0.02mol/L(pH7.4)TBS(內(nèi)含0.1%BSA)洗10min.
(8)1%EA 15min,不洗，滴加PAGlonm 1:40稀釋，室溫1h,
(9)0.05mo!/L(pH7.4)TBS洗10min.
(10)兔抗SPAIgGl:400稀釋，37℃ 30min.
(11)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗10min.
(12)滴加PAGlonm 1:60稀釋，室溫1h,或37℃ 30min.
(13)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗10min.
(14)1%戊二醛洗10min.
(15)雙蒸水洗5min.
(16)1%明膠洗5min.
(17)銀避光顯影8~15min.
(18)雙蒸水洗15min.
(19)固定：用顯影定影液(1:4或1:10)固定5min,也可以用15%硫酸鈉-20%硫代硫酸鈉混合液固定1~3rain，或用1%戊二醛固定5min,50℃溫水洗3~6min.
(20)襯染：核固紅襯染3min或甲基綠襯染3min.
(21)常規(guī)脫水，樹膠封片。
(22)鏡檢：陽性物質(zhì)呈黑色或黑褐色，顆粒分布于抗原-抗體反應(yīng)部位;背景較干凈，呈紅色。
(二)雙PAG法的敏感性
應(yīng)用本法對keratin、AFP、HBsAg、FN、SOD、HCG、F8、P53等組織抗原的定位，連續(xù)4gm石蠟切片，同時用IGSS和雙PAG法，不同的一抗稀釋度，結(jié)果雙PAG法要比IGSS法敏感5~8倍，抗體的稀釋度從1: (1000~5000)提高到1: (10000-50000)，大大節(jié)約了*抗體。尤其組織細(xì)胞內(nèi)抗原性較弱，抗原丟失嚴(yán)重，應(yīng)用雙PAG法均能得到有效的檢測，陽性檢測率和陽性強(qiáng)度有了明顯的提高。某些抗原用單一的SPA金標(biāo)探針對某些抗原只能獲得低強(qiáng)度的染色，當(dāng)用雙PAG法時可獲得強(qiáng)的特異性染色。
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