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更新時間：2015-07-27 
瀏覽次數：2107上海信帆生物代理銷售“乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒"，現貨供應，歡迎大家。
乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒
測定意義：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 - *肼作用生成丙酮酸*腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；
試劑一：液體15 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用，配好后-20 ℃保存，可保存兩周，禁止反復凍融；
試劑三：液體15 mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體50 mL×1瓶L，4℃保存；
樣品測定的準備：
1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 ：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，棄上清，按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次）。8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液或者生理鹽水進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定操作表（在1mL EP管中反應）：
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
待測樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 250 | 250 |
試劑二 | 50 | |
蒸餾水 | 50 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min
試劑三 | 250 | 250 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min
試劑四 | 750 | 750 |
充分混勻，室溫靜置3分鐘，450 nm下測定吸光度
注意事項：
1、粗酶液的提取必須在0℃ - 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。測定過程中樣本﹑試劑二和標準應用液必須在冰上放置。
3、由于每個樣本都要做測定管和對照管，因此本試劑盒50管可測24個樣本。
LDH活力單位的計算：
1、血清（漿）LDH活力的計算
單位的定義：每升血清（漿）與基質作用15分鐘，在反應體系中生成1 μmol的丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/L）=1379×（A測定管-A對照管）
2、組織中LDH活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白與基質作用15分鐘，在反應體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mg prot）=1379×（A測定管-A對照管）÷蛋白濃度（mg/mL）
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織與基質作用15分鐘，在反應體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/g 鮮重）=1379×（A測定管-A對照管）÷樣本鮮重（g/mL）
3、細菌或細胞中LDH活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白與基質作用15分鐘，在反應體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mg prot）=1379×（A測定管-A對照管）÷蛋白濃度（mg/mL）
（2）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞與基質作用15分鐘，在反應體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/104 cell）=1379×（A測定管-A對照管）÷細菌或細胞密度（104 cell /mL）
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