Elisa試劑盒實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景，告訴你。
Elisa試劑盒洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數。
Elisa試劑盒封閉更關鍵
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
蛋白封閉液則有所不同，是的。它們與開放位點結合并封閉，同時穩定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
Elisa試劑盒抗體濃度須優化
記住，非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
Elisa試劑盒檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優化一下何時應加入終止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔心，依次查看ELISA系統中的組分，并排除可能存在的問題。悉心優化，相信很快就會有漂亮的結果。
更新時間：2019-10-28 
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